基于自剪切肽的斑马鱼荧光自噬探针表达载体的构建开题报告

 2023-04-17 17:14:00

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

1. 斑马鱼模型研究斑马鱼是生长在印度、巴基斯坦淡水河流中的一种硬骨鱼(鲤鱼),成年鱼全身仅长4-5厘米。

斑马鱼很容易在实验室饲养,一般3个月就可以达到生殖成熟期,雌鱼每次产卵200枚左右,一生可产卵数千枚,斑马鱼所产之卵经24小时即可胚胎发育成熟,仔鱼期只有1个月。

更独特的是,斑马鱼的卵是透明的,整个胚胎发育在体外完成,也是透明的,这就使得人们不仅可以很容易得到胚胎,而且还可以在显微镜下直接观察斑马鱼胚胎发育的过程,不仅可作为脊椎动物模型来研究脊椎动物的胚胎发育过程,还是一种可用于人类疾病的研究的模式生物[1]。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

研究内容:利用PCR、分子克隆等技术克隆EGFP、LC3、mCherry基因及斑马鱼mpeg1基因启动子序列;分别构建带有转座子Tol2序列的斑马鱼巨噬细胞特异表达融合基因EGFP-LC3-P2A-mCherry的重组表达载体;将构建的两种质粒通过显微注射共注射斑马鱼胚胎,去验证绿色荧光及红色荧光蛋白在斑马鱼巨噬细胞的特异性表达。

研究手段:1. 克隆EGFP、LC3、mCherry基因及斑马鱼mpeg1基因启动子序列;2. 构建带有转座子Tol2序列的斑马鱼巨噬细胞特异表达融合基因EGFP-LC3-P2A-mCherry的重组表达载体pTol2-EGFP-LC3-P2A-mCherry;3. 斑马鱼的饲养及受精卵的收集;4. 斑马鱼胚胎显微注射pTol2-EGFP-LC3-P2A-mCherry重组表达载体;5. 荧光显微镜下观察红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白的表达;6. 拍照记录及数据分析

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