猪细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）猪细小病毒（pcine parvovirus,ppv）为细小病毒科的细小病毒属。

病毒粒子为二十面体对称结构，外观为圆形或六边形，大小约为20nm。

病毒衣壳含有32个壳粒，有2-3种衣壳蛋白，无囊膜。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究目标：本研究拟根据gen bank登录的ppv ns1 基因序列设计一对特异引物,利用sybr-green-i实时荧光技术进行种病原的扩增，为临床快速诊断提供一种方法。

研究内容：（1）ppv病原的分离及质粒dna的提取。

（2）ppv ns1基因引物的设计与合成。

3. 研究的方法与方案

研究方法：根据sybr-green-i实时荧光定量pcr建立ppv的快速诊断。

技术路线：可行性分析：本实验采用的sybr-green-i实时荧光定量pcr方法属于较为成熟的实验室常规诊断疾病的方法。

实验中所需的实验器材，仪器，实验材料等实验室都可提供。

4. 研究创新点

本实验采用实时荧光定量PCR检测PPV病毒，与传统的疾病诊断方法相比，具有更高的敏感性和特异性，还节省了大量的时间和人力，是目前猪病实验室快速诊断的发展方向。

实时荧光定量PCR与传统PCR相比，操作更加方便且检出的阳性率更高。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展：2018年3月（1）制备标准品设计针对ppv ns1基因序列的特异引物并对相应基因克隆扩增，连接pmd19-t载体后转入dh5α克隆。

测序并测质粒纯度和浓度，计算稀释得到标准品。

（2）反应条件的优化：得到标准曲线2018年4月 （1）特异性、重复性、敏感性实验。