猪流行性腹泻病毒S蛋白的原核表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）课题意义：pedv(猪流行性腹泻病毒)可引起各日龄猪患猪流行性腹泻病，主要症状为呕吐和腹泻；尤以低日龄仔猪发病最为严重，断奶仔猪和育肥猪发病率可达100%，死亡率高达 95%以上。

到目前为止 ,我国已有26个省市自治区报道了ped的发生和流行情况 ,说明ped在我国己经广泛存在,成为我国重要的猪传染病之一 ,对国内的养猪业造成了巨大的经济损失。

s蛋白是pedv的纤突糖蛋白，位于病毒粒子表面，能够调节病毒与特异宿主细胞受体的相互作用，在pedv侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用；且s蛋白含有主要的抗原决定簇, 有很好的免疫原性, 能诱导机体产生中和抗体, 在机体的抗病毒免疫中起重要作用。

2. 研究的基本内容和问题

二、研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究目标：优化PEDV S基因密码子，克隆入原核表达载体，通过基因工程方法表达PEDV的S蛋白，并纯化所表达的S蛋白。

研究内容：①S蛋白基因密码子的优化②S1、S2蛋白诱导表达的条件的优化③表达蛋白纯化条件的优化④蛋白的大量表达及纯化拟解决的关键问题：S基因含有大量的疏水性氨基酸，将其密码子优化为大肠杆菌偏噬性密码子，但蛋白的表达与否跟诱导条件有很多关系，因此本实验的关键问题是诱导条件的优化。

3. 研究的方法与方案

三、研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法 优化pedv s基因密码子后，通过基因克隆方法将目的基因片段与质粒载体连接。

然后通过原核表达条件优化方法，诱导s蛋白的表达，并通过sds-page与western-blot鉴定蛋白是否表达。

最后通过蛋白纯化方法大量纯化s蛋白。

4. 研究创新点

四、特色或创新之处本课题所用PEDV毒株为新型变异毒株，其S蛋白基因原核表达的条件尚需探索；本课题优化了S蛋白基因密码子，为PEDV S蛋白基因的原核表达开拓了新思路。

5. 研究计划与进展

五、研究计划及预期进展研究计划：①2017年9月至2017年10月：完成课题准备，制定实验方案，密码子优化合成。

②2017年10月至2017年11月：进行首轮试验，根据实验结果修改实验参数。

③2017年11月至2018年1月：重复试验，直至实验成功。