冬季中国部分地区奶牛乳房炎病原菌的分离和鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

目前,全世界约有2.2亿头奶牛,其中1/3的奶牛患有各种类型的乳房炎,每年因此而造成的损失高达350亿美元,仅美国的损失就达20亿美元以上,德国为4.5亿马克,其中70%的损失是来自隐性乳房炎引起的产奶量下降[1]。

我国奶牛乳房炎发病率高达50%左右,每年因隐性乳房炎造成的损失约3.15亿元。

不但给奶牛养殖业带来巨大的经济损失，同时也时刻危胁着人类健康[3]。

2. 研究的基本内容和问题

引起奶牛乳房炎的致病菌种类较多，本实验目标为分离奶样中的无乳链球菌。

乳房炎的致病球菌的种类有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌等，其中还有一些短杆菌状的细菌与无乳链球菌的形态相似，在染色镜检过程中不易区分，所以在pcr扩增之后进行凝胶电泳，将条带长度符合无乳链球菌的产物进行基因序列的检测，确定所分离到的细菌为无乳链球菌。

一般送检的奶样中可能感染了一种以上的致病菌，或者非致病菌。

3. 研究的方法与方案

本研究通过对奶样的微生物培养，分别进行划线培养、分离纯化、染色镜检的步骤，进行初步判断，进一步通过pcr进行鉴别判定，将电泳结果符合无乳链球菌的基因序列长度的样品进行基因测序，最后根据基因测序结果进行判定。

将测序结果为阳性的菌液冻存在-80℃。

技术路线：微生物培养→划线培养→染色镜检→pcr扩增→基因测序→鉴别判定该实验方案切实可行，所需仪器设备和试剂全面，具体实验操作难度适中，结果通过基因测序进行判定，准确可靠。

4. 研究创新点

本次实验方法采取了传统的微生物培养和pcr技术相结合的方式。

微生物的分离培养和鉴定是诊断奶牛乳房炎的最高标准，而pcr检测方法从基因水平对致 病性乳汁进行检测，操作简便快速，敏感性高，特异性强，对乳房炎细菌的快速诊断具有很大的实用价值和意义。

两种方式配合进行，为检测奶牛乳房炎的流行病学研究提供了快速、准确的检测方法。

5. 研究计划与进展

首先，在研究开始之前进行奶牛乳房炎的致病菌的相关资料查询、收集、整理，并完成引起奶牛乳房炎的病原菌的文献综述。

在对引起奶牛乳房炎的致病菌进行充分了解的情况下，进行试验的设计和实验可行性的分析，并书写试验计划书。

在实验开始之前进行相关材料的准备，如血平板的制备、thb培养基的制备等。