日本沼虾中β-葡萄糖苷酶23克隆和表达研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

日本沼虾，学名日本沼虾(macrobrachium nipponense)，隶属于十足目、长臂虾科、沼虾属，是我国重要的淡水经济虾类品种。

日本沼虾主要生活在淡水水域，以淡水湖、河、池、沼中为主，在我国各地均有分布，但主养区主要集中在江苏、上海、浙江、安徽、江西等省份。

据2013年《中国渔业年鉴》公布，2012年日本沼虾养殖产量23.7万吨，养殖面积约40万公顷，日本沼虾养殖业年产值约200亿元，是我国水产养殖业的重要组成部分。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标，初步分析β-葡萄糖苷酶23基因在日本沼虾中的功能。

以采购于无锡太湖边的野生太湖日本沼虾为原材料，以促雄腺为模板，对β-葡萄糖苷酶23克隆，并利用生物信息分析的相关软件对其特征进行分析，最后通过在日本沼虾不同组织(精巢、卵巢、促雄腺、眼柄等组织)进行定量表达分析，从而初步分析其在日本沼虾中的功能，确定其是否为性别相关基因。

拟解决的关键问题：1.β-葡萄糖苷酶23基因cdna全长的克隆；2.通过分析β-葡萄糖苷酶23基因在日本沼虾不同组织中的表达量，初步分析其在日本沼虾中的功能。

3. 研究的方法与方案

1. 研究方法：(1)将实验用虾进行促雄腺总rna的提取，并对总rna的质量进行分析；(2)合成促雄腺总rna第一链cdna的模板，对β-glucosidase 23基因中间序列进行pcr扩增，将pcr产物切胶回收并克隆测序，验证中间片段正确性；(3)合成3race和5race模板，对β-glucosidase 23基因进行cdna序列全长克隆以及序列分析；(4)对β-glucosidase 23基因在日本沼虾不同组织中进行定量表达研究。

2. 技术路线（见附件）3. 可行性分析：本实验所需实验条件成熟。

且采样团队经验丰富，所用实验的日本沼虾来源正规、体格标准。

4. 研究创新点

关于β-葡萄糖苷酶的研究目前主要在植物以及微生物方面，此次在日本沼虾上做β-葡萄糖苷酶23的克隆和表达分析，如果能够成功，为首次在水产动物对该基因进行克隆及表达研究。

且如果分析得出此基因为性别相关基因，可极大推动日本沼虾全雄群体培育，经济价值及应用前景广泛。

5. 研究计划与进展

9月末，对实验相关理论知识的学习补充，对实验器材、试剂等的认识，对分子生物学实验流程的跟踪学习10月至11月初，实验样本促雄腺总RNA的提取，提取的总RNA浓度的测定以及质量检测，促雄腺总RNA第一链cDNA的合成11月末至12月末，β-glucosidase 23基因中间序列的获得和验证，.PCR产物切胶回收并克隆测1月初，β-glucosidase 23基因cDNA序列全长克隆2月末至3月，β-glucosidase 23基因不同组织的定量表达研究4月，整理数据，撰写毕业论文