中梅山猪生长性能表型测定及NR6A1基因与体重体尺的关联性分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1. 课题意义

   梅山猪是由长江下游南部浏河两岸地区的古老猪种大花脸猪演变而来的，以繁殖力高著称于世，是迄今国际上已知产仔数最高的品种之一，受到国内外的普遍重视。梅山猪与外种猪相比有性成熟早、抗逆性强、肉质优良、耐粗饲等优良特性，但生长性能较差。近年来分子标记辅助选育技术应用越来越广，这种技术可有效提升猪的生长性能。其中，igf-2已经被证实是影响猪体重的候选基因，nr6a1是影响猪体尺的候选基因。本实拟通过：到昆山市梅山猪保种场进行纯种梅山猪二月龄、四月龄和六月龄体重体尺测定；通过分栏，记录十个栏位中59头梅山猪77天饲料总消耗量，再根据其个体初始、终止体重，得到个体日增重和以栏为单位的料重比数据；采集纯种有完整系谱和繁殖记录的梅山猪耳组织样，利用pcr反应与dna测序分型技术分型，并用sas软件进行基因型与体重体尺的关联性分析，来探究候选基因对梅山猪体重体尺是否有影响，以期能为梅山猪生长性能改良提供参考。

2. 国内外研究概况

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   2. 研究的基本内容和问题

   1.研究目标

   1. 梅山猪料重比

   2. 梅山猪日增重

   3. 梅山猪二月龄、四月龄和六月龄体重体尺测定

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      3. 研究的方法与方案

      1.研究方法

      采用实验室检测与动物试验相结合的方法开展相关试验研究。

      2. 技术路线

      3.实验方案

      a.料重比

      昆山市梅山猪保种场内59头母猪，分为十个栏位（每个栏位10头，其中一个栏位9头），在相同饲养条件下，采用自由采食的方式记录77天每个栏位的饲料消耗量、个体初始体重以及个体终止体重。从而得到料重比。

      b.日增重

      昆山市梅山猪保种场内59头母猪，分为十个栏位（每个栏位10头，其中一个栏位9头），在相同饲养条件下，采用自由采食的方式记录77天梅山猪个体初始体重与终止体重，从而得到日增重。

      c.梅山猪二月龄、四月龄和六月龄体重体尺测定

      1.实验动物来源

      昆山市梅山猪保种场中的纯种仔猪，从二月龄开始，使用皮尺、直尺、测量杖、套猪绳等测量工具，对每个梅山猪进行体重体尺测定，每间隔两个月测定一次，直至六月龄。

      2.测定方法

      体重：将称准备好，调整至稳定，将猪赶到称中间，记录数据。

      体尺根据性能测定标准《种猪测定原理及方法》进行。

      体高：自鬐甲最高点到地面的垂直距离，用测杖测量。

      体长：自枕寰关节（两耳根连线的中点）沿背线至尾根的长度。

      胸围：沿肩甲后缘绕胸一周的周径。

      腹围：腹部最大的地方胸一周的周径。

      腿臀围：肛门到一侧膝关节前缘的距离乘以2。

      管围：左前肢管部最细处周径。

      3.数据收集

      测定的指标均用纸质表格记录，并用Excel整理成电子版。

      d.梅山猪生长性能测定与分析

      1. 实验动物来源

      采集纯种梅山猪的耳组织样品，放置于装有70%酒精的离心管内，-20 ℃冰箱保存备用。利用传统酚/氯仿法提取耳组织基因组DNA，经过质量、浓度检测后将浓度稀释到30ng/μL于-20 ℃下保存备用。

      2.目的片段PCR扩增与测序

      用已提取的DNA为模板，根据NCBI上提供的序列利用Primer-Blast设计引物，所设计的引物，用已提取的DNA为模板，根据所设计的引物，进行PCR扩增：取DNA模板1 μL、上下游引物各1 μL、PCR Mix试剂22 μL。

      3.结果与分析

      PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶中电泳检测，将剩余的扩增产物进行测序，测序结果用DNAman软件与GenBank中猪的相关基因片段序列比对、分析，判读突变的基因型，然后利用SAS软件进行基因型对表型的影响效应分析。

      分析模型为Y=μ G_j S_j D_K e_ijk

      其中：Y 为所测得的表型；μ表示平均数；G_j和S_j分别是基因型和性别的固定效应，D_K是日龄的协变量，e_ijk代表随机误差。

      显著性的P值经过10000次的随机抽样校正。

      4.可行性分析

      1. 昆山市国家级梅山猪保种场内工作人员经验丰富，实验危险系数很低。

      2. 梅山猪保种场资料保存完善齐全且猪场采样方便。

      3. 动科院教学实验中心拥有完善的试验用设备，为本试验的开展提供了保障。

      4. 指导老师魏巨龙老师对猪繁殖育种有一定研究基础，为本试验的研究指导工作提供了有效的保证。

      5. 本研究设计合理，方法先进，技术路线正确，加之本实验室具有良好的研究条件，研究小组所有成员具有强烈的责任心和浓厚的科学研究兴趣，因此，本研究是切实可行的。

      4. 研究创新点

      梅山猪是我国非常重要的猪种，以梅山猪为研究对象，测定了现今梅山猪日增重、料重比、体重体尺的表型数据，通过实验，探究相关基因与生长性能及体尺相关性，以期为后续开展梅山猪各方面特性研究及选育，对梅山猪的保种及利用提供参考。

      5. 研究计划与进展

      2018年7月--10月：梅山猪生长性能（料重比、日增重）、体尺测定；

      2018年9月--11月：利用传统酚/氯仿法提取耳组织基因组dna，经过质量、浓度检测后将浓度稀释到30 ng/μl于-20 ℃下保存备用；

      2019年1月：用已提取的dna为模板，根据所设计的引物，进行pcr扩增；

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