生殖系特异性P53敲除对小鼠睾丸精原干细胞数量的影响研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1 课题意义

p53基因在动物机体细胞组织的生长、发育与分化等过程中发挥着重要的作用，并且主要在dna修复、阻滞细胞周期、抑制血管生成、诱导细胞凋亡中起生物学功能，p53的缺失会导致细胞癌变^[1]。突变型p53基因不仅失去肿瘤抑制功能，并且获得新功能，可以诱导某些基因的异常表达^[2]。研究表明，p53基因可调控干细胞的分化，调节干细胞的自我更新。p53基因上调促进干细胞的分化，p53基因下调维持干细胞干性，抑制分化^[3]。

精原干细胞(spermatogonial stem cells，sscs)位于雄性动物睾丸曲细精管的基膜上，不仅可以通过自我更新产生新的sscs，维持恒定的数量，还可以在体内和体外信号的调控下增殖分化为各阶段的生殖细胞，最终产生精子^[4]。研究发现p53参与精原细胞相关基因的调控，如kit或fas，而p53或fas的缺失可以挽救kit突变小鼠的生精功能衰竭，表明p53或fas基因可能参与精原干细胞的质量控制^[5]。还有研究发现，p53蛋白可以抑制精原干细胞重要因子plzf的转录活性,从而导致精原干细胞数目的减少^[6]。因此推测p53在生殖系统基因调控中对精原干细胞的数量可能起到了非常重要的影响。

2. 研究的基本内容和问题

2.1研究目标

本实验通过构建p53floxed-ddx4 cre转基因小鼠，在生殖系特异性的敲除p53基因，检测生殖细胞中p53基因缺失对精原干细胞数目的影响，从而初步分析p53基因对小鼠精原干细胞自我更新能力的影响。

3. 研究的方法与方案

3.1研究方法

①制备p53floxed-ddx4 cre小鼠；

②组织包埋：取睾丸组织进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片；

4. 研究创新点

特色或创新之处

（1）目前p53基因对于癌症、胚胎干细胞的作用研究较多，对小鼠精原干细胞的作用研究较少；

（2）深入研究p53对精原干细胞分化的影响，将在深入阐明精子发生机制，治疗人类不育症，保护动物种质资源，转基因动物的生产等方面发挥积极作用。

5. 研究计划与进展

2018年6月——2018年9月查阅文献，完善试验计划；

2018年9月——2018年12月饲养小鼠实验；

2019年1月——2019年3月实验室分析；