生防假单胞菌Pseudomonas protegens　Pf-5菌株的一个LuxR转录调控因子功能研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）1.1本课题的意义生防假单胞菌是研究革兰氏阴性生防菌的模式菌，该类菌中的一些重要种如p. protegens、荧光假单胞（p. fluorescens ）和绿针假单胞（p. chlororaphis）等已经广泛应用于植物病害生物防治。

这类高效生防菌株通常具备一些共性特征，如能产生大量的抑菌活性物质和定殖能力强等。

因此，研究这类菌的活性物质调控机理和定殖规律，能为提高活性物质的产量和菌株的环境竞争能力，提供理论依据。

2. 研究的基本内容和问题

2.1 研究目标orfamide a是生防菌p. protegens 利用ofa 操纵子合成的一类具有抑菌活性和表面活性的脂肽类物质。

这类物质是生防菌p. protegens群集运动所必需的。

而群集运动对于生防菌定殖活性起着重要作用。

3. 研究的方法与方案

3.1研究的方法采用无标记基因敲除技术构建菌株的luxr基因突变菌株，利用能在该类菌株自主复制的载体构建luxr基因的回补体，采用绿色荧光载体构建标记菌株。

3.2技术路线(见附录）3.3 实验方案luxr基因突变体的构建通过基因敲除和转基因等技术手段构建荧光假单胞菌的luxr基因缺失体，以及回补体。

观测luxr基因对于荧光假单胞菌表型的影响通过荧光标记测荧光假单胞菌的生物膜厚薄以及观测荧光假单胞菌群集运动情况等表型观测记录，研究luxr基因在荧光假单胞菌中的功能。

4. 研究创新点

4 本项目的特色与创新之处； 本项目以生防假单胞菌Pf-5菌株中未知功能的luxR基因为研究对象，研究该因子在荧光假单胞菌中的功能。

该研究能丰富假单胞菌的调控网络，同时为此类生防菌的应用提供理论支撑。

5. 研究计划与进展

5.1 研究计划2017.6-7：查阅资料文献，制定研究计划及相关技术路线2017.7-11：Pf-5ΔluxR和回补体的构建2017.11-12：生物膜表型和群集运动的测定2018.1-3：实验补充和收尾和论文撰写5.2 预期进展本研究通过构建Pf-5菌株luxR基因缺失体和回补体，与野生型相比较发现luxR基因的存在与否对于Pf-5菌株的某些表型确实有一定影响。