元谋暗蝗线粒体基因组全序列测定与分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

线粒体是真核生物特有的细胞器，为细胞生命活动提供能量，是能量代谢、氧化磷酸化的场所。

线粒体基因组是细胞质遗传，进化速率快，分子量小，基因组稳定，一定程度上有利于线粒体dna的分离测序[1]，故线粒体基因组作为研究基因组结构、功能和进化的最佳模型，相关研究已经取得较为丰硕的成果[2]。

而应用线粒体基因进行分子系统学研究,可以解决蝗虫各分类阶元之间的进化关系,确立一些有争议物种的分类地位,探讨相关物种的系统地理等[3]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：1、完成元谋暗蝗线粒体基因组全序列测定与分析。

2、明确元谋暗蝗的编码基因、trna、和rrna和 a-t 富集区的序列组成，排列顺序。

3、明确元谋暗蝗的trna以及rrna的二级结构。

3. 研究的方法与方案

1．研究方法：1.1 研究标本： 1.1.1 元谋暗蝗标本（用无水乙醇浸泡并保存在-20度冰箱）1.2.实验试剂与仪器： 1.2.1 实验试剂： dna提取试剂盒 琼脂糖 无水乙醇 蛋白酶 dna marker 2000 1.2.2实验设备： 数显恒温水浴锅 自动高压灭菌锅 家用电冰箱 微波炉 研磨棒、枪头、离心管、镊子、剪刀、玻璃器皿 精密移液枪 超纯水仪 25μlpcr管 电泳仪 电泳槽 蓝光凝胶观察仪1.3研究方法 1.3.1 dna提取 本实验选取元谋暗蝗的后腿肌肉组织，使用dna提取试剂盒提取dna，步骤如下：（1）镊子夹取蝗虫标本，用纯水冲洗数遍，用吸水纸将水分吸干，剪取股节肌肉，放入离心管，吸取180μl缓冲液atl，加入20μl蛋白酶，用剪刀剪碎，随后放入恒温水浴锅56度加热2~3小时，其间不断震荡。

（2）当离心管中液体清凉，几乎没有浑浊时，将其从水浴锅中取出，离心后取上清液到另一离心管内，加入200μl缓冲液al混匀。

（3）再加入200μl无水乙醇混匀。

4. 研究创新点

获得元谋暗蝗的线粒体基因组全序列注释结果。

提供蝗总科亲缘关系研究中元谋暗蝗的资料。

5. 研究计划与进展

2017.9-2017.12采用pcr扩增与一代测序技术扩增元谋暗蝗线粒体基因组序列,并对序列进行了测序、组装、注释、分析。

2018.1-2018.3确定蛋白编码基因、trna 和 rrna 的排列顺序、序列信息。

并进行trna二级结构预测2018.3-2018.4分析数据，整理结果，撰写论文。